Пептидните фармацевтични съставки (API) са привлекли значително внимание във фармацевтичната индустрия поради високата си специфичност, ниската токсичност и потенциала за лечение на широк спектър от заболявания. Като водещ доставчик на пептидни APIS, ние се ангажираме да предоставяме висококачествени пептидни продукти чрез модерни методи за синтез. В този блог ще се задълбочаваме в различните начини, по които се синтезират пептидните API.
Синтез на фазов пептид (SPP) (SPP)
Синтезът на фазовия пептид е един от най -широко използваните методи за синтезиране на пептидни API. Този подход е създаден от Робърт Брус Мерифийлд през 1963 г., който революционизира пептидния синтез и му спечели Нобеловата награда за химия през 1984 г.
Основният принцип на SPP включва закрепване на С -края на първата аминокиселина към неразтворима твърда опора, като смола. Тази смола осигурява стабилна платформа за последващи химични реакции. Амино групата на прикрепената аминокиселина е защитена с подходяща защитна група, обикновено FMOC (9 - флуоресметилоксикарбонил) или BOC (Tert - бутилоксикарбонил).
След като първата аминокиселина е прикрепена към смолата, защитната група в неговата амино група се отстранява, излагайки реактивната група амино. Следващата аминокиселина, също със защитената от амино група, след това се свързва със свободната амино група на предварително прикрепената аминокиселина, използвайки свързващ реагент. Commonly used coupling reagents include DIC (N,N' - diisopropylcarbodiimide), HBTU (O - benzotriazole - N,N,N',N' - tetramethyl - uronium - hexafluoro - phosphate), and HATU (O - (7 - azabenzotriazol - 1 - yl) - N,N,N',N' - Тетраметилуроний хексафлуорофосфат).
След всеки етап на свързване, нереагиралите амино групи са ограничени, за да се предотврати образуването на последователности на делеция. Това обикновено се прави с помощта на оцетен анхидрид. Цикълът на депротекция, свързване и затваряне се повтаря за всяка аминокиселина в желаната пептидна последователност.
След като цялата пептидна последователност е сглобена върху смолата, пептидът се разцепва от смолата с помощта на коктейл за разцепване. Този коктейл също премахва всякакви странични групи за защита на веригата, които присъстват на аминокиселините по време на синтеза. След това разцепеният пептид се пречиства по методи като течна хроматография с висока производителност (HPLC).
Разтвор - Фазов пептиден синтез
Разтвор - Фазовият пептид синтез е по -стар метод, но все пак има своите предимства в определени ситуации. При този метод всички реакции се осъществяват в разтвор и пептидът не е прикрепен към солидна опора.
Синтезът започва със защитата на амино и карбоксилните групи на отделните аминокиселини. Подобно на SPP, за защита на групи като FMOC или BOC се използват за групата на амино, а естерните групи се използват за защита на карбоксилната група.
Първата стъпка е свързването на две защитени аминокиселини за образуване на дипептид. Това се постига с помощта на свързващ реагент, подобен на този, използван в SPP. След образуването на дипептида, защитните групи в единия край на дипептида се отстраняват и след това той се съчетава с друга защитена аминокиселина или дипептид, за да се образува по -дълъг пептид.
Процесът се повтаря стъпка - чрез - стъпка, докато се получи желаната пептидна последователност. Едно от предизвикателствата на синтеза на разтвора - фазата е пречистването на междинните пептиди на всеки етап, тъй като реакционната смес съдържа различни от продукти и нереагирали изходни материали. Пречистването обикновено се извършва чрез екстракция, кристализация или хроматография.
Химическо лигиране
Химическото лигиране е мощен метод за синтезиране на големи пептиди или протеини, които са трудни за сглобяване, използвайки традиционния синтез на SPP или разтвор - фаза. Един от най -добре известните методи за химическо лигиране е местната химическа лигация (NCL).
В NCl пептид със С -терминалният тиоестер реагира с друг пептид с N - крайния цистеин остатък. Реакцията възниква при леки водни условия и води до образуване на естествена пептидна връзка между двата пептида.
Процесът включва първо синтезиране на два или повече пептидни сегмента, използвайки синтеза на SPP или разтвор - фаза. Единият сегмент се приготвя с C -терминалния тиоестер, а другият с N - терминален цистеин. След това тези сегменти се смесват в подходящ буфер и се осъществява реакцията на лигацията. След лигиране, ако е необходимо, цистеиновият остатък може да бъде допълнително модифициран или използван като дръжка за допълнителни химични реакции.
Конвергентен синтез
Конвергентният синтез е стратегия, която съчетава предимствата както на SPP, така и на химическото лигиране. Вместо да синтезират цялата пептидна последователност по линеен начин, пептидът е разделен на по -малки сегменти, които се синтезират отделно с помощта на SPP.
След това тези сегменти се лигират заедно, използвайки методи за химическо лигиране. Този подход намалява броя на етапите на свързване, необходими за синтеза на големи пептиди, което може да подобри общия добив и чистота на крайния продукт. Например, дълъг пептид може да бъде разделен на три или четири сегмента, всеки от които съдържа 10 - 20 аминокиселини. Тези сегменти се синтезират върху смолата, разцепени и след това се лигират по конвергентен начин.
Примери за нашите пептидни API
Ние предлагаме широка гама от пептидни API, включителноC20 - OTB - Glu (OBBU) - ATBI10 - ATBU) Снимки - O OIE - OANA - OE,C20 (OTBU) - Glu (OTBU)иPalmitoyl - Glu (OSU) - OTBU. Тези пептиди се синтезират, използвайки описаните по -горе усъвършенствани методи, като се гарантира висока чистота и качество.
Контрол на качеството в синтеза на пептидни API
Контролът на качеството е от изключително значение в синтеза на пептидни API. Съществуваме цялостна система за контрол на качеството, за да гарантираме, че нашите продукти отговарят на най -високите стандарти.
След синтеза пептидът се анализира чрез различни техники, включително HPLC, масспектрометрия (MS) и ядрен магнитен резонанс (NMR). HPLC се използва за определяне на чистотата на пептида, докато MS се използва за потвърждаване на молекулното тегло на пептида. NMR може да предостави информация за структурата и конформацията на пептида.
Ние също така провеждаме проучвания за стабилност, за да гарантираме, че пептидните API остават стабилни при различни условия на съхранение. Това включва тестване на пептида при различни температури, рН стойности и при наличие на различни помощни вещества.
Заключение
Синтезът на пептидните API е сложен и мулти -стъпков процес, който изисква усъвършенствани техники и строг контрол на качеството. Като доставчик на пептидни APIS непрекъснато изследваме нови методи и технологии, за да подобрим ефективността и качеството на нашия синтез. Независимо дали става въпрос чрез синтез на твърд фазов пептид, синтез на фазов фазов, химически лигиране или синтез на конвергент, ние се ангажираме да предоставим на нашите клиенти висококачествени пептидни продукти.
Ако се интересувате от закупуване на нашите пептидни API или имате въпроси относно синтеза на пептиди, не се колебайте да се свържете с нас за дискусии за обществени поръчки. Очакваме с нетърпение да работим с вас, за да отговорим на вашите нужди от пептидни API.
ЛИТЕРАТУРА
- Полета, GB, & Noble, RL (1990). Синтез на фазов пептид, използващ 9 - флуоненилметоксикарбонил аминокиселини. International Journal of Peptide and Protein Research, 35 (2), 161 - 214.
- Dawson, PE, Muir, Tw, Clark - Lewis, I., & Kent, SBH (1994). Синтез на протеини чрез местно химическо лигиране. Science, 266 (5186), 776 - 779.
- Chan, WC, & White, PD (2000). Синтез на пептид на твърд фазов пептид: практически подход. Oxford University Press.