-
Телефон
+86-0755 2308 4243
-
Адрес
Стая 309, Meihua Building, Taiwan Industrial Park, No.2132 Songbai Road, Bao'an District, Шенжен, Китай
-
Имейл
ЧЗВ
Какви методологии за синтез използват Biorunstar за пептиден синтез?
RE: Biorunstar са разработили различни методологии за синтез на фаза на решение, за да отговорят на изискванията на клиентите. Обикновено се прилага твърдофазова Fmoc химия.
Как доставяте пептиди? Какви данни за QC ще бъдат предоставени?
RE: Всички пептиди ще бъдат изпратени с DHL или FedEx express като лиофилизиран прах в индивидуални добре етикетирани флакони, при стайна температура. С изключение на суровите пептиди, които ще бъдат проверени само чрез MALDI-MASS спектрометрия, всички синтетични пречистени пептиди идват с доклад за проекта (CoA), MS данни и HPLC данни. ще бъдат осигурени информационни листове, които съдържат ключовите характеристики, като пептидна последователност, чистота, количество, модификация, данни от масовия спектър и HPLC данни.
Какво е типичното време за оборот на пептидния синтез? Колко време отнема доставката до мен?
RE: Типичното ни време за изпълнение е 2-3 седмици за стандартен пептид под 30 аминокиселини. Времето за обръщане варира в зависимост от дължината на пептида, количеството, разтворимостта и трудността. Обикновено 3-5 дни за достигане до изследователи в други държави.
Колко дълго можете да синтезирате?
RE: Biorunstar има богат опит в синтезирането на дълги пептиди, до 130aa. За разлика от много доставчици на пептиди, които са удобни само в производството на пептиди под 30 или 40 аа, Biorunstar има добър опит в производството на пептиди, вариращи от 40 аа до 90 аа. Трудно е да се синтезират дълги пептиди, особено 100aa или по-дълги. Ако планирате да синтезирате последователност от 130aa или по-дълга, моля, свържете се с нас за персонализирана протеинова експресия и услуга за пречистване.
Ами ако възникнат проблеми по време на процеса на синтез или пречистване?
RE: Всеки пептид има свои специфични характеристики. Ако по време на синтеза се появят проблеми извън нашите очаквания и не можем да доставим вашия пептид навреме, ще ви информираме възможно най-скоро. Ако случайно не можем да направим пептида, няма да бъдете таксувани за никакви разходи.
Форма на TFA сол, ацетат или HCl форма на сол: Коя форма да избера?
По подразбиране пептидите се синтезират в TFA сол. За експерименти, свързани с клетъчни или тъканни култури, трябва да помислите за пептиди, произведени в ацетатна или HCl форма на сол при 98% или по-висока, за да избегнете необичайни реакции. Ацетатна или HCl форма на сол може да бъде поискана срещу допълнително заплащане.
Какъв е срокът на годност на пептида?
RE: Пептидите са стабилни минимум една година, ако се съхраняват лиофилизирани във фризер. Ако пептидите се разтворят, срокът на годност може да бъде намален. Ако пептидите съдържат няколко реактивни аминокиселини, които могат да бъдат окислени като Trp, Met, но особено Cys, срокът на годност също може да бъде намален.
Пептидът съдържа няколко цистеина и следователно може лесно да образува дисулфидни връзки. Как да избегна това?
RE: Ако пептидната последователност съдържа няколко цистеина или други реактивни аминокиселини, които лесно се окисляват, Biorunstar предлага да достави пептида със следи от силния редуктор DTT. Пептидът се доставя с DTT само ако това е изрично разрешено от клиента.
Как да съхранявам моите синтетични пептиди?
RE: Повечето лиофилизирани пептиди ще бъдат стабилни при стайна температура за 2-3 седмици. За дългосрочно съхранение трябва да съхранявате лиофилизирани пептиди при -20 градуса. Повтарящите се цикли на замразяване-размразяване трябва да се избягват. Оставете да достигне стайна температура преди отваряне. Срокът на годност на пептидните разтвори е ограничен; веднъж приготвен пептиден разтвор трябва да се използва възможно най-скоро.
Каква е чистотата на суровия пептид и обезсоления пептид? Как пречиствате пептида? Какви са примесите?
RE: За къси пептиди с нормални последователности под 15aa обикновено е 40-60% от HPLC за суров клас; 50-70% чрез HPLC за обезсолен клас. Колкото по-дълъг е пептидът, толкова по-ниска е чистотата за суров или обезсолен. Пептидите обикновено се пречистват чрез HPLC, като се използва градиент на вода и ацетонитрил. Повечето примеси са фрагменти или делеционни пептиди, пептиди с непълна защита и остатъчна сол и вода.
Обяснение на чистотата на пептида чрез HPLC, общо пептидно съдържание и целево пептидно съдържание.
RE: Biorunstar доставя пептиди според брутното тегло на лиофилизирания прах. Лиофилизираният прах включва примеси като фрагменти или делеционни пептиди, непълно депротектирани пептиди, TFA и остатъчна вода. Чистотата на пептида се измерва чрез HPLC. Това е количеството правилен пептид спрямо всички аналити, които абсорбират при ~214 nm (пептидната връзка абсорбира), най-вероятно делеция, съкращаване или непълно депротектирани последователности и т.н. Чистотата на пептида чрез HPLC не взема предвид вода и соли които обикновено присъстват в пробата. Общото пептидно съдържание е процентът на общите налични пептиди спрямо всичко, присъстващо в лиофилизирания пептиден прах. Общото съдържание на пептид се определя чрез анализ на съдържанието на азот. Така целевото пептидно съдържание в лиофилизирания пептиден прах може да се заключи по формулата: Общо пептидно съдържание X чистота на пептид чрез HPLC.
Какъв е методът за маркиране с флуоресцеин?
RE: FITC (флуоресцеин изотиоцианат) е активираният прекурсор, използван за маркиране на флуоресцеин. За ефективно N-терминално етикетиране, седем атомен аминохексаноил
между флуорофора (флуоросцеин) и N-край на пептида. Този разделител помага за отделянето на флуорофора от неговата точка на закрепване, като потенциално намалява взаимодействието на флуорофора с биомолекулата, към която е конюгиран, и го прави по-достъпен за реагентите за вторично откриване.
между флуорофора (флуоросцеин) и N-край на пептида. Този разделител помага за отделянето на флуорофора от неговата точка на закрепване, като потенциално намалява взаимодействието на флуорофора с биомолекулата, към която е конюгиран, и го прави по-достъпен за реагентите за вторично откриване.
Възможно ли е С-терминално маркиране на биотин (или FITC)?
RE: Да. С-терминалното маркиране на биотин (или FITC) се извършва чрез добавяне на лизинов остатък към С-края на пептид и биотинът (или FITC) е прикрепен към страничната верига на лизин чрез амидна връзка. Положителният заряд на лизина се премахва.
Каква е подходящата дължина на пептида за производството на антитяло?
RE: Обикновено се препоръчва 10-25 остатъчен пептид. Един по-дълъг пептид може да има повече епитопи, но също така може да има по-голям шанс за образуване на стабилни вторични структури, които не са естествени форми. По-къс пептид (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Какво е КАРТА?
RE: MAPS или мулти-антигенен пептид е разклонен пептид, при който линейните пептидни вериги са свързани в своя С-край чрез полилизиново ядро, като по този начин увеличават размера на цялата молекула. Това се прави, за да се елиминира свързването на пептидите с KLH. Изглежда обаче, че конформацията на пептидите върху MAP е по-малко гъвкава и антителата, получени чрез MAP, обикновено разпознават целевия протеин по-рядко, отколкото чрез конвенционалното KLH конюгиране. В допълнение, няма свободен пептид, произведен при производството на MAPS, което затруднява отстраняването на антитела, насочени към полилизиново ядро. Пречистването на MAPS чрез HPLC е трудно и MAPS се предоставя без масова проверка поради неговата хетерогенност и големия молекулен размер.
Защо моят KLH-конюгиран пептиден разтвор изглежда мътен?
RE: KLH или хемоцианинът от Keyhole Limpet е голям агрегиращ протеин (MW=4x105 – 1x107). Поради неговия размер и структура, разтворимостта му във вода е ограничена, което води до мътен вид. Това няма да повлияе на имуногенността и мътният разтвор може да се използва за имунизации.
Можете ли да обясните масовите пикове на M+Na и M+K в MALDI спектрите?
RE: Много често се виждат адукти на Na (натрий) и K (калий) в спектъра на MALDI. Натрият и калият идват от водата, използвана в пептидните разтворители. Дори дестилираната и дейонизирана вода има следи от натриеви и калиеви йони, които никога не могат да бъдат напълно отстранени. Те се йонизират по време на MALDI масовия процес и се свързват със свободните карбоксилни групи на пептида. Тъй като няма система за пречистване на вода, която да отстрани всеки един натриев или калиев йон от водата, виждането на натриеви и калиеви адукти понякога е много често и неизбежно в масовата спецификация на MALDI. Това не е индикация, че пептидът не е чист, нито трябва да се бърка с неправилно молекулно тегло.