Ей там, колеги ентусиасти на клетките! Като доставчик на Tet - 213 клетки, имах моя справедлив дял от опит, занимаващ се с тези уникални клетки. В този блог ще споделя някои съвети как да поддържам жизнеспособността на Tet - 213 клетки.
Първо, нека разберем какви са Tet - 213 клетки. Те са вид клетъчна линия, която показа голям потенциал в различни изследователски области, като невронауки и изследвания на рака. Но поддържането им живи и ритането не винаги е разходка в парка.
Среда на клетъчната култура
Основата на поддържането на всяка клетъчна линия е правилната културална среда. За Tet - 213 клетки, висококачествена среда е задължителна. Обикновено препоръчвам да използвате среда, която е богата на основни хранителни вещества. RPMI 1640 среда, допълнена с 10% фетален говежди серум (FBS), пеницилин и стрептомицин, ми върши чудеса. FBS осигурява растежните фактори и хормоните, които тези клетки трябва да процъфтяват, докато антибиотиците помагат да се предотврати замърсяването.
Не забравяйте да съхранявате средата правилно. Дръжте го на 4 ° C и го предпазвайте от светлина. Преди да го използвате, загрейте до 37 ° C във водна баня. Това имитира телесната температура и е по -удобно за клетките.
Инкубационни условия
Tet - 213 клетки са доста придирчиви към средата си. Те обичат да се инкубират при 37 ° С във влажна атмосфера с 5% Co₂. Тази среда много прилича на физиологичните условия в човешкото тяло.
Инвестирайте в добър инкубатор. Той трябва да има стабилна температура и CO₂ контрол. Редовно проверявайте настройките и калибрирането на инкубатора, за да се уверите, че всичко е наред. Също така, почиствайте редовно инкубатора, за да предотвратите изграждането на замърсители.
Субкултуриране
Субкултурирането е важна стъпка за поддържане на клетъчната жизнеспособност. Когато Tet - 213 клетки достигнат около 80 - 90% сливане, е време да ги разделите. Първо, отстранете старата среда и измийте клетките с фосфатно - буфериран физиологичен разтвор (PBS), за да се отървете от всякакви отломки. След това добавете разтвор на трипсин - EDTA, за да отделите клетките от културната колба. Инкубирайте колбата при 37 ° С за няколко минути, докато клетките започнат да се закръгляват и да се отделят.
След като клетките се отделят, добавете прясна среда, за да неутрализирате трипсина. Центрифугиране на клетъчната суспензия с ниска скорост, за да нанесете на клетките. Ресуспендирайте пелетата в прясна среда и прехвърлете клетките в нови колби на културата при подходяща плътност на засяването. Плътността на засяването от около 5 x 10⁴ клетки/cm² обикновено работи добре за Tet - 213 клетки.
Мониторинг на здравето на клетките
Редовното наблюдение на здравето на вашите Tet - 213 клетки е от решаващо значение. Използвайте фаза - контрастен микроскоп, за да проверите морфологията на клетките. Здравословните тет - 213 клетки трябва да имат еднаква форма и да бъдат добре прикрепени към колбата. Ако забележите някакви признаци на клетъчна смърт, като плаващи клетки или анормални клетъчни форми, това може да е знак за проблем.
Можете също да извършите анализ на жизнеспособността, като тест за изключване на Trypan Blue. Смесете малко количество от клетъчната ви суспензия с трипаново синьо. Живите клетки ще изключат багрилото, докато мъртвите клетки ще го приемат и изглеждат сини. Пребройте броя на живите и мъртвите клетки, използвайки хемоцитометър за изчисляване на процента на жизнеспособност на клетките.
Качество на реагентите
Използването на висококачествени реагенти не е по договаряне. Качеството на FBS, антибиотиците и други добавки може да окаже значително влияние върху клетъчната жизнеспособност. Когато избирате FBS, потърсете партида, която е тествана заради способността му да поддържа растежа на клетките. Избягвайте да използвате реагенти с изтекъл срок на годност или реагенти, които са съхранявани неправилно.
Някои други фактори, които трябва да се вземат предвид, са пептидите, които могат да се използват заедно с Tet - 213 клетки. Например,Меланоцитен протеин PMEL 17 (130 - 138) (човек)е показал потенциал в някои изследвания, свързани с клетъчната сигнализация.Урехистахинин I.иДинорфин А (1 - 17)също са пептиди, които могат да бъдат изследвани в контекста на изследване на Tet - 213 Cell.
Отстраняване на неизправности
Ако имате проблеми с поддържането на жизнеспособността на вашите Tet - 213 клетки, не изпадайте в паника. Ето някои често срещани проблеми и решения:
Замърсяване: Ако видите признаци на бактериално или гъбично замърсяване, като облачност в средните или видимите колонии, веднага изхвърлете замърсените култури. Почистете инкубатора и цялото оборудване. Уверете се, че следвате строги асептични техники, когато боравите с клетките.
Лош растеж на клетките: Ако клетките не растат добре, проверете културната среда. Възможно е средата да е стара или добавките да не работят правилно. Също така, уверете се, че условията на инкубацията са правилни. Понякога лека промяна в температурата или концентрацията на CO₂ може да повлияе на растежа на клетките.
Клетъчен отряд: Ако клетките се отделят твърде лесно, това може да се дължи на прекалено - трипсинизация. Намалете времето за инкубация на трипсина следващия път. Също така, уверете се, че разтворът на Trypsin - EDTA е свеж.
В заключение, поддържането на жизнеспособността на Tet - 213 клетки изисква внимание към детайлите и добро разбиране на техните нужди. Следвайки тези съвети, можете да поддържате своите Tet - 213 клетки здрави и продуктивни.
Ако сте на пазара за висококачествени Tet - 213 клетки, ще се радвам да си поговоря с вас. Независимо дали сте изследовател, работещ по малък мащаб или голяма мащабна биотехнологична компания, мога да ви осигуря клетките, от които се нуждаете. Обърнете се, за да започнете разговор за вашите изисквания и как можем да работим заедно.
ЛИТЕРАТУРА
- Freshney, RI (2016). Култура на животинските клетки: Ръководство за основна техника и специализирани приложения. Уайли.
- Doyle, A., & Griffiths, JB (2012). Клетъчна и тъканна култура: лабораторни процедури. Уайли - Блеквел.