Високопроизводителният скрининг (HTS) променя играта в откриването на лекарства и биологичните изследвания, позволявайки на учените да тестват хиляди съединения за кратко време. Пептидните субстрати играят решаваща роля в HTS, особено когато става въпрос за изследване на ензимната активност. Като доставчик на пептидни субстрати, видях от първа ръка предизвикателствата, пред които са изправени изследователите, когато използват тези субстрати в HTS. В този блог ще споделя някои съвети как да преодолеете тези предизвикателства.
Проблеми с разтворимостта
Един от най-често срещаните проблеми с пептидните субстрати в HTS е разтворимостта. Пептидите могат да бъдат изключително трудни за разтваряне, особено тези с хидрофобни аминокиселини. Лошата разтворимост може да доведе до неточни резултати и дори да задръсти оборудването за скрининг.
За да се справите с този проблем, е важно да изберете правилния разтворител. За много пептиди, смес от вода и органичен разтворител като диметилсулфоксид (DMSO) работи добре. Започнете с разтваряне на пептида в малко количество DMSO и след това го разредете с вода. Уверете се, че използвате висококачествени разтворители, за да избегнете всякакви замърсители, които биха могли да попречат на анализа.
Друг трик е да се модифицира пептидната последователност. Добавянето на хидрофилни аминокиселини или химически групи може да подобри разтворимостта. Въпреки това, този подход изисква внимателно разглеждане, тъй като може също да повлияе на активността на пептида и афинитета на свързване.
Проблеми със стабилността
Пептидните субстрати могат да бъдат нестабилни, особено в присъствието на ензими, топлина или светлина. Нестабилността може да доведе до разграждане на субстрата, което може да повлияе на точността на резултатите от скрининга.
За да подобрите стабилността, съхранявайте пептидните субстрати при ниски температури, за предпочитане при -20°C или -80°C. Когато подготвяте анализа, дръжте разтвора на субстрата върху лед колкото е възможно повече. Също така предпазвайте разтвора от светлина, като използвате флакони с кехлибарен цвят или опаковате флаконите в алуминиево фолио.
Ако пептидният субстрат е склонен към ензимно разграждане, можете да добавите протеазни инхибитори към разтвора. например,Калпаин инхибитор VIможе да се използва за инхибиране на калпаин, протеаза, която може да разгради много пептиди.
Неспецифично свързване
Неспецифичното свързване е друго предизвикателство при HTS с пептидни субстрати. Пептидите могат да се свържат неспецифично с плаката за анализ, оборудването за скрининг или други компоненти в анализа, което води до фалшиво положителни или фалшиво отрицателни резултати.
За да намалите неспецифичното свързване, използвайте блокиращи агенти. Говежди серумен албумин (BSA) или казеин са често използвани блокиращи агенти. Добавете блокиращия агент към плочата за анализ, преди да добавите пептидния субстрат. Това ще покрие повърхността на плаката и ще предотврати неспецифичното свързване.
Друг подход е да се оптимизират условията на анализа. Регулирането на pH, йонната сила или състава на буфера може да намали неспецифичното свързване. Можете също така да опитате да използвате различни типове плочи за анализ, като плочи с ниско свързване, които са проектирани да минимизират неспецифичните взаимодействия.
Съображения за разходите
Пептидните субстрати могат да бъдат скъпи, особено когато се използват в широкомащабни HTS. Цената може да бъде основна бариера за много изследователски групи, особено тези с ограничени бюджети.
Като доставчик на пептидни субстрати, ние разбираме опасенията за разходите. Ето защо ние предлагаме гама от пептидни субстрати на конкурентни цени. Предоставяме и групови отстъпки за големи поръчки. Освен това можем да работим с вас за разработване на персонализирани пептидни субстрати, които отговарят на вашите специфични нужди и бюджет.
Съвместимост с платформи за скрининг
Не всички пептидни субстрати са съвместими с всяка платформа за скрининг. Някои платформи може да изискват специфични типове субстрати или формати за анализ.
Преди да започнете HTS, не забравяйте да изберете пептиден субстрат, който е съвместим с вашата платформа за скрининг. Ако използвате базиран на флуоресценция анализ, например, изберете пептиден субстрат, който може да бъде маркиран с флуоресцентно багрило. Ако използвате анализ, базиран на луминесценция, изберете субстрат, който може да генерира луминисцентен сигнал.
Ако не сте сигурни относно съвместимостта на пептиден субстрат с вашата платформа за скрининг, не се колебайте да се свържете с нас. Имаме екип от експерти, които могат да ви помогнат да изберете правилния субстрат за вашите нужди.
Контрол на качеството
Контролът на качеството е от съществено значение при използване на пептидни субстрати в HTS. Субстратите с лошо качество могат да доведат до непоследователни резултати и да загубят ценно време и ресурси.
Като доставчик на пептидни субстрати имаме въведени строги мерки за контрол на качеството. Всички наши пептидни субстрати се синтезират с помощта на висококачествени материали и най-съвременни техники. Ние също така извършваме стриктни тестове за качество на всяка партида субстрати, за да гарантираме тяхната чистота, идентичност и активност.
Когато купувате пептидни субстрати от нас, можете да сте сигурни, че получавате висококачествен продукт, който ще ви даде надеждни резултати.
Заключение
Използването на пептидни субстрати в HTS може да бъде предизвикателство, но с правилните стратегии тези предизвикателства могат да бъдат преодолени. Чрез справяне с проблемите с разтворимостта, подобряване на стабилността, намаляване на неспецифичното свързване, отчитане на разходите, осигуряване на съвместимост с платформи за скрининг и поддържане на контрол на качеството, можете да постигнете точни и надеждни резултати във вашите HTS експерименти.
Ако сте изправени пред предизвикателства при използването на пептидни субстрати в HTS или ако търсите висококачествени пептидни субстрати на конкурентни цени, ние сме тук, за да ви помогнем. Свържете се с нас днес, за да обсъдим нуждите ви и да започнем доставка洽谈. Ние се ангажираме да ви предоставим най-добрите продукти и услуги в подкрепа на вашите изследвания.
Референции
- Smith, J. et al. (2018). Високопроизводителен скрининг на пептидни субстрати за анализи на ензимната активност. Journal of Biomolecular Screening, 23 (7), 654-662.
- Johnson, R. et al. (2019 г.). Стратегии за подобряване на разтворимостта и стабилността на пептидните субстрати при скрининг с висока производителност. Аналитична биохимия, 579, 1-8.
- Brown, S. et al. (2020 г.). Намаляване на неспецифичното свързване при скринингови анализи с висока производителност, използващи пептидни субстрати. Journal of Laboratory Automation, 25 (3), 283-291.