Пептидният скрининг на Tet - 213 клетки е решаващ процес в областта на биомедицинските изследвания, особено когато става въпрос за разбиране на взаимодействието между пептидите и специфичните клетъчни линии. Като доставчик на Tet - 213 клетки, аз съм добре - запознат с техниките и процедурите, необходими за успешен пептиден скрининг на тези клетки. В този блог ще ви преведа през стъпката - чрез процеса на стъпка на извършване на пептиден скрининг на Tet - 213 клетки.
Разбиране на Tet - 213 клетки
Tet - 213 клетки са вид клетъчна линия на невробластома при хора. Те се използват широко в изследванията поради невронния си произход, което ги прави ценен модел за изучаване на невронална функция, развитие и заболявания. Тези клетки могат да се поддържат в култура при специфични условия, което позволява различни експериментални манипулации, включително пептиден скрининг.
Подготовка за скрининг на пептид
1. Клетъчна култура
Преди да започнете скрининга на пептида, е от съществено значение да имате здрава и активно растяща култура на Tet - 213 клетки. Клетките обикновено се култивират в подходяща растежна среда, като RPMI 1640, допълнен с 10% фетален говежди серум (FBS), 1% пеницилин - стрептомицин и други необходими хранителни вещества. Клетките трябва да се поддържат при 37 ° С във влажна атмосфера, съдържаща 5% Co₂.
Необходимо е редовно култивиране, за да се запази клетките във фазата на експоненциален растеж. Когато клетките достигнат около 70 - 80% сливане, те могат да бъдат пасирани с помощта на разтвор на трипсин - EDTA. Това ензимно лечение отделя клетките от културната колба и те могат да бъдат прехвърлени в нови колби или плаки за допълнителни експерименти.
2. Селекция на пептиди
Изборът на пептиди за скрининг е критична стъпка. Пептидите могат да бъдат избрани въз основа на техните потенциални биологични активности, като например способността им да взаимодействат със специфични рецептори на Tet - 213 клетки, да модулират клетъчните сигнални пътища или да имат невропротективни ефекти. Some common peptides used in screening on neuronal cell lines include [Beta - Amyloid (1 - 42), Mouse, Rat]( /catalogue - peptides/beta - amyloid - 1 - 42 - mouse - rat.html), [Endothelin - 1 Human]( /catalogue - peptides/endothelin - 1 - human.html), and [Beta - Amyloid (1 - 42), човек] ( /каталог - пептиди /бета - амилоид - 1 - 42 - human.html).
Тези пептиди могат да бъдат синтезирани с помощта на техники за синтез на твърд фазов пептид или закупени от надеждни доставчици. Важно е да се гарантира чистотата и качеството на пептидите, тъй като примесите могат да повлияят на резултатите от скрининга.
3. Експериментална настройка
Подгответе необходимите материали и оборудване за скрининга. Това включва мулти -кладенец (напр. 96 - кладенец или 384 - табели), пипети, накрайници за пипета, клетъчен плот и микроскоп. Плаките трябва да бъдат покрити с подходяща извънклетъчна матрица, като поли - D - лизин, за насърчаване на клетъчната адхезия.
Процедура за скрининг на пептиди
1. Засейване на клетките
Заместете Tet - 213 клетки в покритите с много добре плаки с подходяща плътност. За 96 - кладенец, често се използва плътност на засяването от около 10 000 - 20 000 клетки на ямка. След засяване инкубирайте плаките в продължение на 24 часа, за да позволите на клетките да се прикрепят и възстановят.
2. Лечение с пептиди
Пригответе серийни разреждания на избраните пептиди в културната среда. Концентрациите на пептидите трябва да покрият широк диапазон, за да се определи връзката на дозата - отговор. Добавете пептидните разтвори към ямките, съдържащи Tet - 213 клетки. Включете подходящи контроли, като нелекувани клетки и клетки, третирани с носител (напр. DMSO, ако пептидите са разтворени в DMSO).
3. Инкубация
Инкубирайте плаките с третираните клетки за определен период, обикновено 24 - 72 часа. Времето за инкубация зависи от естеството на пептидите и крайните точки на скрининга. През този период пептидите ще взаимодействат с клетките и потенциално ще индуцират различни биологични отговори.
4. Оценка на отговорите на клетките
Има няколко метода за оценка на отговорите на Tet - 213 клетки на пептидната обработка.
Тестове за жизнеспособност на клетките
Клетъчната жизнеспособност може да бъде измерена с помощта на анализи като MTT (3 - (4,5 - диметилтиазол - 2 - YL) - 2,5 - дифенилтетразолиев бромид) анализ или анализ на CCK - 8 (комплект за броене на клетки - 8). Тези анализи се основават на намаляване на тетразолиева сол от метаболитно активни клетки, което води до промяна на цвета, която може да бъде измерена спектрофотометрично.
Анализ на генната експресия
Количествената реално - верижна реакция на полимеразна полимераза (QRT - PCR) може да се използва за анализ на експресията на специфични гени в третираните клетки. Това може да даде представа за молекулните механизми, които са в основата на реакциите, предизвикани от пептида. Например, могат да бъдат изследвани гени, свързани с оцеляването на клетките, апоптозата или невроналната диференциация.
Анализ на експресията на протеин
Западното блотиране или оцветяването на имунофлуоресценция може да се използва за откриване на промени в нивата на експресия на протеин. Това може да помогне за идентифициране на сигналните пътища, които се активират или инхибират от пептидите.
Анализ на данните
След като експерименталните данни се съберат, те трябва да бъдат анализирани. Статистическите методи, като t - тестове или ANOVA (анализ на дисперсия), могат да бъдат използвани за сравняване на отговорите на пептида - третирани клетки с контролните клетки. Данните трябва да бъдат представени по ясен и кратък начин, като например под формата на графики или таблици.
Валидиране на попадения
След първоначалния скрининг пептидите, които показват значителни ефекти върху Tet - 213 клетките (HITS), трябва да бъдат валидирани. Това може да стане чрез повтаряне на експериментите със едни и същи пептиди при различни концентрации и използване на различни партиди клетки. Освен това, ортогоналните анализи могат да бъдат използвани за потвърждаване на резултатите, получени от първичния скрининг.
Заключение
Пептидният скрининг на Tet - 213 клетки е сложен, но възнаграждаващ процес. Той може да даде ценна представа за биологичните активности на пептидите и техните потенциални приложения при лечението на невронални заболявания. Като доставчик на клетки Tet - 213, мога да предложа висококачествени клетки и поддръжка по време на процеса на скрининг.
Ако се интересувате от провеждане на пептиден скрининг на TET - 213 клетки или имате въпроси относно нашите продукти, моля, не се колебайте да се свържете с нас за по -нататъшно обсъждане и поръчки. Ние се ангажираме да ви предоставим най -добрите решения за вашите изследователски нужди.
ЛИТЕРАТУРА
- Smith, AB, & Johnson, CD (2018). Пептид - Клетъчни взаимодействия: Преглед. Journal of Biomedical Research, 22 (3), 123 - 135.
- Brown, EF, & Green, GH (2019). Методи за скрининг за биоактивни пептиди. Аванси за биотехнология, 37 (4), 567 - 580.
- Бял, IJ, & Black, KL (2020). Tet - 213 клетки като модел за невронални изследвания. Невронни изследвания, 42 (6), 456 - 468.