В областта на биологичните изследвания клетъчната линия Tet - 213 се очертава като важен модел за различни експериментални изследвания, особено в проучвания, свързани с невронауката и онкологията. Като водещ доставчик на Tet - 213 клетки, ние разбираме важността на избора на подходящи трансфекционни реагенти за ефективно доставяне на ген в тези клетки. Тази публикация в блога има за цел да проучи трансфекционните реагенти, които са подходящи за TET - 213 и да предоставят представа за техните предимства и ограничения.
Разбиране на Tet - 213 клетки
TET - 213 е човешка невронална клетъчна линия, която обикновено се използва в изследвания поради способността му да се диференцира в неврон - като клетките. Тези клетки са получени от тумор на невробластома и запазват много характеристики на невроналните прогениторни клетки. Техните уникални свойства ги правят ценни за изследване на развитието на невроните, функцията и патогенезата на неврологичните заболявания. Трансфектирането на екзогенни гени в Tet - 213 клетки могат да помогнат на изследователите да разберат функцията на ген, регулаторни механизми и ефектите на специфичните протеини върху клетъчните процеси.
Основни съображения за трансфекция в Tet - 213 клетки
Преди да изберете трансфекционен реагент, трябва да се вземат предвид няколко фактора. Първо, ефективността на трансфекцията е от решаващо значение. Трансфекцията с висока ефективност гарантира, че голяма част от клетките поемат екзогенната ДНК или РНК, което позволява стабилна експресия на целевия ген. Второ, клетъчната жизнеспособност трябва да се поддържа след трансфекция. Някои трансфекционни реагенти могат да бъдат токсични за клетките, което води до клетъчна смърт или анормално клетъчно поведение. Трето, типът на нуклеиновата киселина се трансфектира (ДНК, РНК или олигонуклеотиди) и неговият размер също може да повлияе на избора на трансфекционен реагент.
Трансфекционни реагенти, подходящи за Tet - 213 клетки
Липидни - базирани трансфекционни реагенти
Липидни - базирани трансфекционни реагенти са един от най -често използваните видове трансфекционни средства. Те работят, като образуват липозоми, които капсулират нуклеиновата киселина и се сливат с клетъчната мембрана, което позволява на нуклеиновата киселина да влезе в клетката. Lipofectamine 2000 е добре известен липиден трансфекционен реагент, който се използва широко за трансфектиране на Tet - 213 клетки. Той предлага висока ефективност на трансфекция, сравнително ниска токсичност и е подходяща за трансфектиране както на ДНК, така и РНК.
Механизмът на липофектамин 2000 включва образуването на положително заредени липозоми, които взаимодействат с отрицателно заредената нуклеинова киселина, за да образуват липоплекси. След това тези липоплекси се интернализират от клетките чрез ендоцитоза. След като влезе в клетката, нуклеиновата киселина се освобождава и може да се транспортира до ядрото за генна експресия.
Друг реагент на базата на липиди, Lipofectamine 3000, също показа добри резултати при трансфектиране на Tet - 213 клетки. Това е подобрена версия на Lipofectamine 2000, с подобрена ефективност на трансфекцията и намалена токсичност. Lipofectamine 3000 използва нова формулировка, която позволява по -добро взаимодействие с клетъчната мембрана и по -ефективно доставяне на нуклеинови киселини.
Полимерни - базирани трансфекционни реагенти
Полимерните - базирани на трансфекционни реагенти са друга опция за трансфектиране на Tet - 213 клетки. Полиетиленоминът (PEI) е често използван реагент на базата на полимер. PEI е катионен полимер, който може да кондензира нуклеинови киселини в малки частици и да насърчава усвояването им от клетките. Съобщава се, че постига висока ефективност на трансфекцията в Tet - 213 клетки, особено за ДНК трансфекция. Предимството на PEI е ниската му цена и лекотата на използване. Въпреки това, той може да бъде токсичен за клетките при високи концентрации, така че е необходима внимателна оптимизация на условията на трансфекция.
JetPei е търговски реагент на базата на полимер, който е проектиран така, че да сведе до минимум токсичността, като същевременно поддържа висока ефективност на трансфекцията. Използва се успешно при трансфектиране на Tet - 213 клетки, осигурявайки добър баланс между ефективността на трансфекцията и жизнеспособността на клетките.
Вирусни - базирани на трансфекционни вектори
Вирусните - базирани вектори също се използват широко за доставяне на ген в Tet - 213 клетки. Аденовирусните вектори са известни с високата си ефективност на трансфекция и способността да заразяват както деликационни, така и не -разделящи клетки. Те могат да носят сравнително големи количества екзогенна ДНК и да осигурят силна и устойчива генна експресия. Въпреки това, производството на аденовирусни вектори е по -сложно и се консумира във времето в сравнение с не -вирусни трансфекционни реагенти.
Лентивирусните вектори са друг вариант. Те могат да интегрират екзогенната ДНК в генома на гостоприемника, което води до стабилна генна експресия. Лентивирусните вектори са подходящи за дългосрочни проучвания в Tet - 213 клетки, като генериране на стабилни клетъчни линии. Те обаче изискват и специално боравене поради потенциалните си рискове за биологична част.
Сравняване на трансфекционни реагенти за Tet - 213 клетки
Когато сравнявате различни трансфекционни реагенти, е важно да се вземат предвид тяхната ефективност по отношение на ефективността на трансфекцията, жизнеспособността на клетките, лекотата на използване и разходите. Липидни - базирани на липиди като Lipofectamine 2000 и 3000 са сравнително лесни за използване и имат висока ефективност на трансфекция с приемлива клетъчна жизнеспособност. Те са подходящи както за краткосрочни, така и за дългосрочни експерименти. Полимерни - базирани на полимери реагенти като PEI и JETPEI са разходи - ефективни и могат да постигнат добра ефективност на трансфекцията, но е необходима оптимизация на токсичността. Viral - базирани на вектори предлагат доставка на ген с висока ефективност и стабилна експресия, но изискват по -специализирано оборудване и предпазни мерки за безопасност.
Приложения на трансфектиран Tet - 213 клетки
След като успешно се трансфектират, Tet - 213 клетки могат да се използват в различни приложения. Например, в проучвания на генните функции, трансфектираните клетки могат да се използват за изследване на ролята на специфични гени в развитието и функцията на невроните. Чрез свръхекспресия или събаряне на определен ген, изследователите могат да наблюдават промените в клетъчната морфология, освобождаването на невротрансмитер и пътищата за преобразуване на сигнала.
При откриване на лекарства трансфектираните Tet - 213 клетки могат да се използват като скринингов модел за идентифициране на потенциални терапевтични средства. Например, гени, свързани с неврологични заболявания, могат да бъдат трансфектирани в клетките и след това клетките могат да бъдат лекувани с различни съединения, за да се оцени техните ефекти върху фенотипите, свързани с болестта.
Освен това, Tet - 213 клетки, трансфектирани с гени, кодиращи флуоресцентни протеини, могат да се използват за изследвания на клетъчни изображения на живо. Това позволява на изследователите да наблюдават динамични клетъчни процеси в реално време.
Свързани пептиди за свързани експерименти
В някои експерименти, включващи трансфектирани Tet - 213 клетки, могат да се използват допълнителни пептиди. Например,Цикло (RADFK),Вещество P (9 - 11)иБета - амилоид (1 - 40), човекМоже да се използва в проучвания, свързани с невронална сигнализация, взаимодействие между пептиди - рецептори и невродегенеративни заболявания. Тези пептиди могат да помогнат за по -нататъшно изясняване на механизмите, които са в основата на невроналната функция и развитието на заболяването.
Заключение
Изборът на подходящ трансфекционен реагент за Tet - 213 клетки е от решаващо значение за успешното доставяне на ген и последващи експериментални проучвания. Липидни, базирани на липиди, базирани на полимер и вирусни трансфекционни реагенти имат свои собствени предимства и ограничения. Изследователите трябва внимателно да вземат предвид специфичните изисквания на техните експерименти, като ефективността на трансфекцията, жизнеспособността на клетките и вида на нуклеиновата киселина, които се трансфектират, когато избират трансфекционен реагент.
Като доставчик на Tet - 213 клетки, ние се ангажираме да предоставяме висококачествени клетки и предлагаме насоки за най -добрите практики за клетъчната култура и трансфекция. Ако се интересувате от закупуване на Tet - 213 клетки за вашето изследване или имате въпроси относно трансфекционните реагенти и свързаните с тях експерименти, моля, не се колебайте да се свържете с нас за допълнителна информация и да обсъдите потенциалните възможности за сътрудничество.
ЛИТЕРАТУРА
- Sambrook, J., & Russell, DW (2001). Молекулярно клониране: лабораторен наръчник. Лабораторна преса на Cold Spring Harbour.
- Chen, C., & Okyama, H. (1987). Трансформация на висока ефективност на клетките на бозайници чрез плазмидна ДНК. Молекулярна и клетъчна биология, 7 (8), 2745 - 2752.
- Amara, F., Rehem, A., & Galy, A. (2016). Преглед на текущите методи на трансфекция и системи за доставка. Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, 8 (3), 181 - 187.