Как се определят количествено каталожните пептиди?
Здравейте! Аз съм доставчик на каталожни пептиди и днес искам да поговорим за това как определяме количествено тези малки момчета. Пептидите са изключително важни в цял куп области, от изследванията до медицината, и получаването на точно количествено определяне е от решаващо значение.
Първо, нека поговорим защо изобщо трябва да определяме количествено каталожните пептиди. Е, когато изследователи или хора в областта на медицината използват пептиди, те трябва да знаят точно с какво количество работят. Независимо дали става въпрос за лабораторен експеримент, клинично изпитване или разработване на ново лекарство, точните количества са от значение. Ако използвате твърде малко, резултатите ви може да не са точни, а ако използвате твърде много, можете да объркате всичко.
И така, как да го направим? Има няколко различни метода и аз ще ги разбия за вас.
Един от най-разпространените начини е UV - Vis спектроскопията. Този метод се възползва от факта, че пептидите абсорбират ултравиолетова и видима светлина при определени дължини на вълната. Аминокиселините като триптофан, тирозин и фенилаланин имат определени абсорбционни свойства. Когато излъчваме светлина с определена дължина на вълната през разтвор на нашия пептид, можем да измерим колко от тази светлина се абсорбира. Въз основа на стойността на абсорбция и известния коефициент на екстинкция на пептида (който е свързан с неговия аминокиселинен състав), можем да изчислим концентрацията на пептида в разтвора. Например, ако имаме пептид с високо съдържание на триптофан, той ще абсорбира повече светлина при около 280 nm. Използваме проста формула, базирана на закона на Биър - Ламберт, за да изчислим концентрацията. Това е относително бърз и лесен метод, но има някои ограничения. Замърсителите в пептидния разтвор могат също да абсорбират светлина при същите дължини на вълната, което може да отхвърли нашите измервания.
Друг популярен метод е анализът на Брадфорд. Това е колориметричен анализ, който разчита на багрило, наречено Coomassie Brilliant Blue G - 250. Когато това багрило се свърже с пептида, той променя цвета си. След това можем да измерим абсорбцията на оцветения разтвор при определена дължина на вълната (обикновено около 595 nm). Степента на промяна на цвета е пропорционална на количеството пептид в разтвора. Създаваме стандартна крива, като използваме известни концентрации на референтен пептид и след това сравняваме абсорбцията на нашата неизвестна пептидна проба с тази крива, за да определим концентрацията й. Тестът на Брадфорд е доста чувствителен, но може да бъде повлиян от определени вещества в пробата, като детергенти или соли.
HPLC, или високоефективна течна хроматография, също се използва широко за количествено определяне на пептиди. При HPLC ние разделяме пептида от другите компоненти в пробата въз основа на неговите химични свойства, като неговата хидрофобност. Инжектираме пептидния разтвор в колона, пълна със стационарна фаза, и след това използваме подвижна фаза (течен разтворител), за да прокараме пептида през колоната. Различни пептиди ще се движат през колоната с различна скорост и ние можем да ги открием, докато излизат от колоната с помощта на детектор, обикновено UV детектор. Чрез сравняване на площта на пика на нашия пептид, който представлява интерес, с площите на пика на известни стандарти, можем да изчислим неговата концентрация. HPLC е страхотен, защото може да разделя и количествено определя пептиди дори в сложни смеси, но отнема малко повече време и изисква специализирано оборудване.
Сега, нека поговорим малко за някои от каталожните пептиди, които предлагаме. ВземетеЕнтеро-Хиламбатиннапример. Когато определяме количествено този пептид, използваме комбинация от тези методи, за да получим най-точния резултат. Първо използваме UV - Vis спектроскопия, за да получим груба оценка на концентрацията, а след това я проверяваме двойно с HPLC. По този начин можем да отчетем всички потенциални замърсители или смущения в пробата.
Друг еE[c(RGDyK)]2. Този пептид има някои уникални свойства и трябва да сме много внимателни, когато го определяме количествено. Анализът на Брадфорд може да не е най-добрият избор тук поради неговия специфичен аминокиселинен състав, така че ние разчитаме повече на HPLC и UV-Vis спектроскопия.
И тогава имаМаздутид (Lys20(N3-CH2CO-)). Това е по-сложен пептид и ние използваме многоетапен подход. Започваме с UV - Vis, за да получим първоначално отчитане, след което използваме HPLC, за да го отделим от всякакви примеси и да получим по-точно количествено определяне.
В нашата компания контролът на качеството е голяма работа. Уверяваме се, че следваме стриктни протоколи, когато определяме количествено нашите каталожни пептиди. Провеждаме множество тестове на всяка партида и сравняваме нашите резултати със сертифицирани референтни материали, за да гарантираме точност. Ние също така поддържаме подробни записи на всички количествени данни, така че нашите клиенти могат да имат пълно доверие в пептидите, които купуват.
Ако сте на пазара за висококачествени каталожни пептиди и се нуждаете от точно количествено определяне, ние сме тук, за да ви помогнем. Независимо дали сте изследовател, който търси пептиди за следващия си голям експеримент, или фармацевтична компания, разработваща ново лекарство, ние разполагаме с пептидите, от които се нуждаете. Нашият екип от експерти е винаги на разположение, за да отговори на всички въпроси, които може да имате относно нашите продукти или процеса на количествено определяне. Така че, не се колебайте да се свържете и да започнете разговор за вашите нужди от пептиди. Ние сме готови да работим с вас, за да намерим най-добрите решения за вашите проекти.
Референции
- Scopes, RK (1994). Пречистване на протеини: принципи и практика. Спрингър.
- Skoog, DA, West, DM, Holler, FJ, & Crouch, SR (2013). Основи на аналитичната химия. Cengage Learning.
- Bollag, DM, Rozycki, MD, & Edelstein, SJ (1996). Протеинови методи. wiley - liss.