Като доставчик на пептидни субстрати, бях в окопите на света на биотехнологиите, наблюдавайки от първа ръка тънкостите на производството на антитела. Един въпрос, който продължава да изниква е: Кои са факторите, влияещи върху ефективността на производството на антитела с помощта на пептидни субстрати? Е, нека се потопим направо и да проучим тази тема.
Качество на пептидния субстрат
Първо, качеството на пептидния субстрат е безсмислено. Висококачествените пептиди са като основата на добре изградена къща. Ако пептидите са нечисти, те могат да доведат до всякакви проблеми в производството на антитела. Например, примесите могат да предизвикат нежелани имунни реакции или да попречат на свързването между пептида и клетките, произвеждащи антитяло.
Когато говорим за качество, то включва аспекти като чистотата на пептидната последователност. Дори едно малко отклонение в последователността може да направи голяма разлика. Една единствена грешна аминокиселина може да промени конформацията на пептида и в резултат на това произведените антитела може да не разпознаят мишената толкова ефективно.
ВземетеMu - Val - HPh - FMKнапример. Този пептиден субстрат е проектиран със специфична последователност за насочване към определени протеази. Ако производственият процес има някакви проблеми и последователността не е точно правилна, антителата, произведени срещу него, може да не работят според очакванията. Така че осигуряването на най-високо ниво на чистота и правилна последователност е от решаващо значение за ефективното производство на антитела.
Концентрация на пептид
Друг ключов фактор е концентрацията на пептидния субстрат. Това е малко като готвене; ако използвате твърде малко или твърде много съставка, ястието няма да се получи правилно. При производството на антитела, ако концентрацията на пептид е твърде ниска, може да няма достатъчно антиген за стимулиране на силен имунен отговор. Клетките, произвеждащи антитела, може дори да не "забележат" пептида и производството на антитела ще бъде минимално.
От друга страна, ако концентрацията е твърде висока, това може да бъде непосилно за клетките. Това може да доведе до неспецифично свързване и производство на антитела, които не са много специфични за мишената. Намирането на най-доброто място за концентрация на пептиди е от съществено значение. Това обикновено изисква някои проби и грешки, в зависимост от вида на клетките, използвани за производството на антитела и природата на самия пептид.
Конюгация на носител протеин
През повечето време пептидите са твърде малки, за да предизвикат силен имунен отговор сами. Това е мястото, където се намесват протеините носители. Конюгирането на пептида с протеин носител може значително да подобри имунния отговор и по този начин ефективността на производството на антитела.
Изборът на протеинов носител е от голямо значение. Някои често срещани протеини-носители включват хемоцианин от ключалката (KLH), говежди серумен албумин (BSA) и овалбумин. Всеки протеин-носител има свои собствени характеристики. KLH, например, е известен като силно имуногенен, което означава, че може да предизвика силен имунен отговор. Но има и някои недостатъци, като това, че е голяма и сложна молекула, която може да предизвика някои неспецифични реакции.
При конюгиране на пептида към протеина носител методът на конюгиране също е важен. Ако конюгацията не се извърши правилно, пептидът може да не бъде представен по правилния начин на имунната система. Това може да доведе до подоптимален имунен отговор и по-ниска ефективност на производството на антитела.
Адюванти
Адювантите са вещества, които се добавят към сместа пептид - протеинов носител за подобряване на имунния отговор. Те действат чрез стимулиране на имунната система по различни начини, като например чрез активиране на имунните клетки или създаване на локален възпалителен отговор.
Има различни видове адюванти, като адювант на Freund (както пълен, така и непълен), стипца и синтетични адюванти. Пълният адювант на Freund е много ефективен за стимулиране на силен имунен отговор, но също така може да причини някои странични ефекти, като увреждане на тъканите и болка на мястото на инжектиране. Стипцата е по-мек адювант и често се използва, когато се желае по-малко агресивен имунен отговор.
Изборът на адювант зависи от няколко фактора, включително природата на пептида, вида на необходимото антитяло и етичните съображения. Използването на правилния адювант може да направи голяма разлика в ефективността на производството на антитела.
Условия за клетъчна култура
Ако произвеждате антитела in vitro (в лабораторни условия), условията на клетъчната култура са изключително важни. Температурата, pH и хранителният състав на културалната среда могат да повлияят на растежа и функцията на клетките, произвеждащи антитела.
Клетките се нуждаят от стабилна среда, за да процъфтяват. Ако температурата е твърде висока или твърде ниска, това може да забави метаболитните процеси на клетките, включително производството на антитела. pH на средата също трябва да се поддържа внимателно. Леко кисела или алкална среда може да наруши нормалната функция на клетките.
Хранителният състав на средата е друг критичен фактор. Клетките се нуждаят от балансирано снабдяване с аминокиселини, витамини и минерали, за да произвеждат ефективно антитела. Например, аминокиселините са градивните елементи на антителата, така че липсата на незаменими аминокиселини може да ограничи производството на антитела.
Видове гостоприемници
Когато се произвеждат антитела in vivo (в животно), изборът на вида гостоприемник е важен фактор. Различните животни имат различни имунни системи и могат да реагират по различен начин на един и същ пептиден субстрат.
Например, зайците обикновено се използват за производство на антитела, защото те могат да произвеждат антитела с висок титър. Те имат относително голяма имунна система и могат да развият силен отговор на много антигени. Мишките, от друга страна, често се използват за производство на моноклонални антитела. Те са по-малки и по-лесни за боравене, а имунната им система може да се манипулира по-лесно в лабораторията.
Видът гостоприемник обаче също трябва да е съвместим с пептидния субстрат. Някои пептиди може да са по-имуногенни при един вид, отколкото при друг. Така че изборът на правилния вид гостоприемник може да подобри ефективността на производството на антитела.
Съхранение и обработка
Начинът, по който съхранявате и боравите с пептидните субстрати, също може да повлияе на ефективността на производството на антитела. Пептидите са чувствителни молекули и могат да се разградят с течение на времето, ако не се съхраняват правилно.
Пептидите трябва да се съхраняват при ниски температури, обикновено при -20°C или дори по-ниска. Излагането на светлина, кислород и влага могат да причинят разграждане на пептида. Когато работите с пептиди, е важно да използвате чисто и сухо оборудване, за да избегнете замърсяване.
Ако пептидният субстрат се е разградил или е замърсен, това може да доведе до противоречиви резултати в производството на антитела. Така че правилното съхранение и боравене са от съществено значение за поддържане на качеството на пептида и осигуряване на ефективно производство на антитела.
Заключение
Както можете да видите, има много фактори, които могат да повлияят на ефективността на производството на антитела с помощта на пептидни субстрати. От качеството на самия пептид до условията на клетъчната култура и избора на видове гостоприемници, всяка стъпка в процеса има значение.
Ние в нашата компания разбираме важността на тези фактори. Ние се стремим да осигурим най-висококачествени пептидни субстрати, катоSuc - LLVY - AMCиZ - LLY - FMK, на нашите клиенти. Ние също така предлагаме подкрепа и съвети как да оптимизирате процеса на производство на антитела.
Ако се интересувате от закупуването на пептидни субстрати за вашите нужди за производство на антитела или имате въпроси относно факторите, влияещи върху ефективността, не се колебайте да се свържете с нас. Ние сме тук, за да ви помогнем да постигнете най-добрите резултати във вашите изследвания.
Референции
- Харлоу, Е. и Лейн, Д. (1988). Антитела: Лабораторен наръчник. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
- Roitt, I., Brostoff, J., & Male, D. (2001). Имунология. Мосби.
- Ausubel, FM и др. (ред.). (2002). Актуални протоколи в молекулярната биология. Джон Уайли и синове.