Пептидните фармацевтични съставки (API) играят решаваща роля в съвременната медицина, предлагайки целенасочени и ефективни възможности за лечение на широк спектър от заболявания. Като водещ доставчик на пептидни APIS разбираме значението на производството на висококачествени пептиди, които отговарят на най-строгите регулаторни стандарти. Една от ключовите стъпки в производството на пептидни API е пречистването, което гарантира отстраняването на примесите и замърсителите за постигане на желаното ниво на чистота и качество. В тази публикация в блога ще обсъдим стъпките, участващи в пречистването на пептидните API.
Стъпка 1: Синтез на суров пептид
Първата стъпка в пречистването на пептидните API е синтеза на суровия пептид. Обикновено това се прави с помощта на синтез на пептид на твърда фаза (SPP), широко използван метод за химичния синтез на пептиди. В SPP пептидът се изгражда по една аминокиселина наведнъж върху твърда опора, обикновено смола. Аминокиселините са защитени със специфични групи, за да се предотвратят нежелани реакции по време на процеса на синтез. След като пептидната верига е сглобена, тя се разцепи от смолата и се депректира, за да се получи суровият пептид.
Стъпка 2: Първоначална филтрация
След синтеза на суров пептид, реакционната смес съдържа желания пептид, както и различни примеси като нереагирали аминокиселини, свързващи реагенти и фрагменти на смоли. Първият етап на пречистване е да се отстранят тези големи частици и неразтворими примеси чрез филтрация. Прост процес на филтриране с помощта на филтърна хартия или мембранен филтър може ефективно да премахне видимите частици, оставяйки сравнително чист разтвор, съдържащ суровия пептид.
Стъпка 3: Препаративна хроматография
Препаративната хроматография е ключова стъпка в пречистването на пептидните API. Използва се за отделяне на желания пептид от останалите примеси въз основа на техните различни физически и химични свойства. Има няколко вида техники за хроматография, които могат да се използват за пречистване на пептиди, включително хроматография с обратна фаза (RPC), йонообменна хроматография (IEC) и хроматография с изключване на размера (SEC).
- Хроматография с обратна фаза (RPC): RPC е най -често използваната хроматографска техника за пречистване на пептиди. Той се основава на хидрофобните взаимодействия между пептида и стационарната фаза, която обикновено е хидрофобна смола. Суровият пептиден разтвор се зарежда върху RPC колоната и пептидите се елуират с помощта на градиент на полярен разтворител (като вода) и неполярен разтворител (като ацетонитрил). Пептидите с различен хидрофобност ще се елутират в различно време, което ще позволи тяхното разделяне. Например пептид катоSteer-Glu-Oea-Oeu-Osuможе да бъде ефективно пречистено с помощта на RPC.
- Йоно-обменна хроматография (IEC): IEC разделя пептидите въз основа на техния заряд. Стационарната фаза в IEC е смола с заредени функционални групи, катионни или анионни. Суровият пептиден разтвор се зарежда върху колоната IEC и пептидите се елуират с помощта на градиент на буфер с различни йонни якости или стойности на рН. Пептидите с различни заряди ще се свържат със смолата с различни афинитети и се елуират в различно време.
- Хроматография с изключване на размера (SEC): SEC разделя пептидите въз основа на техния размер. Стационарната фаза в SEC е пореста смола, а пептидите се разделят според способността им да влизат в порите на смолата. По -големите пептиди ще се елутират първо, последвани от по -малки пептиди. SEC често се използва като стъпка на полиране след RPC или IEC за отстраняване на всички останали агрегати или примеси с ниско молекулно тегло.
СТЪПКА 4: Осушаване
След подготвителна хроматография, пречистените пептидни фракции могат да съдържат соли и други малки молекули от хроматографските буфери. Обясването е процесът на отстраняване на тези соли за получаване на чист пептиден разтвор. Един често срещан метод за обезсоляване е диализата, при която пептидният разтвор се поставя в диализна торбичка с полупропусклива мембрана и се диализира срещу буфер с ниска концентрация на сол. Друг метод е гел филтрационна хроматография, която може да отдели пептида от солите въз основа на разликите им в размера.
Стъпка 5: Лиофилизация
Лиофилизацията, известна още като сушене на замразяване, е последната стъпка в процеса на пречистване. Тя включва замразяване на пречистения пептиден разтвор и след това отстраняване на водата чрез сублимация под вакуум. Лиофилизацията не само премахва водата от пептидния разтвор, но и стабилизира пептида, като предотвратява разграждането и растежа на микробите. Полученият лиофилизиран пептид е сух прах, който може лесно да се съхранява и транспортира.
Стъпка 6: Контрол на качеството
Контролът на качеството е съществена част от процеса на пречистване на пептид API. След пречистване и лиофилизация пептидът се анализира, като се използват различни аналитични техники, за да се гарантира неговата чистота, идентичност и качество. Някои от общите аналитични техники, използвани за контрол на качеството на пептидите, включват високоефективна течна хроматография (HPLC), масспектрометрия (MS), ядрен магнитен резонанс (NMR) и анализ на аминокиселини.
- Високопроизводителната течна хроматография (HPLC): HPLC се използва за определяне на чистотата на пептида чрез отделяне на пептида от всички останали примеси и количествено определяне на техните количества. Добре пречистеният пептид трябва да има един остър пик върху HPLC хроматограмата, което показва високо ниво на чистота.
- Масспектрометрия (MS): MS се използва за потвърждаване на идентичността на пептида чрез определяне на неговото молекулно тегло. Измереното молекулно тегло на пептида трябва да съответства на теоретичното молекулно тегло, изчислено от неговата аминокиселинна последователност.
- Ядрен магнитен резонанс (ЯМР): ЯМР се използва за определяне на структурата и конформацията на пептида. Той може да предостави информация за химическата среда на аминокиселинните остатъци в пептида и да помогне за потвърждаване на неговата идентичност.
- Аминокиселинен анализ: Аминокиселинният анализ се използва за определяне на аминокиселинния състав на пептида. Измереният състав на аминокиселини трябва да съответства на очаквания състав въз основа на пептидната последователност.
Стъпка 7: Опаковане и съхранение
След като пептидният API е преминал тестовете за контрол на качеството, той е готов за опаковане и съхранение. Пептидът обикновено се опакова в стерилни флакони или ампули под азотна или аргонова атмосфера, за да се предотврати окисляването и разграждането. Опаковащите материали трябва да бъдат избрани така, че да са съвместими с пептида и да осигурят добра бариера срещу влагата, кислорода и светлината. Условията за съхранение на пептидния API зависят от неговата стабилност и трябва да бъдат внимателно контролирани, за да се гарантира дългосрочното му качество.
Като доставчик на пептидни API-та, ние се ангажираме да предоставим на нашите клиенти висококачествени пептидни API, които отговарят на техните специфични изисквания. Нашите най-съвременни съоръжения за пречистване и опитен екип от учени гарантират, че всяка партида пептиден API е пречистена до най-високите стандарти. Ако се интересувате от закупуване на пептидни API катоPalmitoyl -Glu (OSU) -otbuилиFmoc-ser (tbu) -aib-oh, Моля, не се колебайте да се свържете с нас за повече информация и да обсъдите вашите специфични нужди. Очакваме с нетърпение да работим с вас, за да предоставим най -добрите пептидни API решения за вашите фармацевтични изследвания и разработки.
ЛИТЕРАТУРА
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2002). Молекулярна биология на клетката. Garland Science.
- Jones, J. (1991). Аминокиселина и пептиден синтез. Oxford University Press.
- Snyder, LR, Kirkland, JJ, & Glajch, JL (2010). Практическо развитие на HPLC метод. John Wiley & Sons.