Ей там! Като доставчик на каталожни пептиди се справих с много клиенти, изправени пред предизвикателства, свързани с разтворимостта на пептидите. Това е често срещано главоболие, но не се притеснявайте, аз съм тук, за да споделя някои съвети как да оптимизирам разтворимостта на каталожните пептиди.
Първо, нека разберем защо разтворимостта има значение. Пептидите се използват в широк спектър от приложения, от изследвания до терапевтично развитие. Ако пептидът не се разтвори правилно, той може да обърка вашите експерименти или лечения. Например, в изследванията на клетъчната култура, лошо разтворимите пептиди може да не достигнат ефективно целевите клетки, което води до неточни резултати.
Фактори, влияещи върху разтворимостта на пептидите
Преди да се потопим в разтворите, нека разгледаме факторите, които влияят на разтворимостта на пептидите. Един от основните фактори е съставът на аминокиселините. Пептидите, богати на хидрофобни аминокиселини като левцин, изолевцин и валин, са по -малко разтворими във вода. От друга страна, пептидите с високо съдържание на хидрофилни аминокиселини като лизин, аргинин и глутаминова киселина са по -разтворими.
Друг фактор е дължината на пептида. Като цяло по -дългите пептиди са по -малко разтворими, отколкото по -късите. Това е така, защото по -дългите пептиди имат повече хидрофобни области и е по -вероятно да образуват агрегати.
PH на разтвора също играе решаваща роля. Пептидите имат изоелектрична точка (PI), която е рН, при която имат нетен заряд от нула. При PI пептидите са най -малко разтворими и са склонни да се утаяват. И така, регулирането на pH далеч от PI може да подобри разтворимостта.
Стратегии за оптимизиране на пептидната разтворимост
1. Изберете правилния разтворител
Водата често е първият избор за разтваряне на пептиди, но може да не работи за всички пептиди. За хидрофобни пептиди могат да се използват органични разтворители като диметил сулфоксид (DMSO) или ацетонитрил. Въпреки това, бъдете внимателни, когато използвате органични разтворители, тъй като те могат да бъдат токсични за клетките и могат да повлияят на активността на пептида. Добре е да започнете с малко количество органичен разтворител и след това да го разредите с вода.
Например, ако работите с хидрофобски пептид катоВещество P (9-11), Можете да опитате първо да го разтворите в малък обем DMSO и след това да го разредите с вода до желаната концентрация.
2. Регулирайте pH
Както бе споменато по -рано, регулирането на рН може значително да подобри разтворимостта на пептидите. Можете да използвате буфери за контрол на pH. За кисели пептиди използвайте основен буфер като натриев хидроксид (NaOH), за да увеличите рН. За основни пептиди използвайте киселинен буфер като солна киселина (НС1), за да намалите рН.
Когато регулирате pH, важно е да го направите постепенно и да наблюдавате разтворимостта. Можете да използвате PH метър, за да гарантирате, че pH е в желания диапазон.
3. Използвайте почистващи препарати
Детергентите могат да помогнат за разтваряне на хидрофобни пептиди чрез намаляване на повърхностното напрежение и предотвратяване на агрегацията на пептиди. Общите почистващи препарати, използвани за разтворимост на пептиди, включват Tween 20, Triton X-100 и SDS. Въпреки това, имайте предвид, че детергентите могат също да повлияят на активността на пептида и могат да попречат на някои анализи. Така че, използвайте ги с повишено внимание и оптимизирайте концентрацията.
4. Озвучаване
Озвучаването е техника, която използва високочестотни звукови вълни, за да разруши пептидните агрегати и да подобри разтворимостта. Можете да използвате Sonicator, за да озвучете пептидния разтвор за кратък период от време. Въпреки това, внимавайте да не прекалявате, тъй като това може да повреди пептида.
5. Добавете хаотропни агенти
Хаотропните агенти като урея и гуанидин хидрохлорид могат да нарушат нековалентните взаимодействия между пептидните молекули и да подобрят разтворимостта. Те работят, като денатират структурата на пептидите и предотвратяват агрегацията. Въпреки това, подобно на детергентите, хаотропните агенти също могат да повлияят на активността на пептида, така че ги използвайте само когато е необходимо.
Казуси
Нека да разгледаме някои примери в реалния свят за оптимизиране на пептидната разтворимост.
Случай 1:Матричен протеин М1 (58-66) (грип А вирус)
Клиент изпитваше проблеми с разтварянето на този пептид във вода. Пептидът е богат на хидрофобни аминокиселини, затова препоръчахме да започнем с малък обем DMSO. Също така коригирахме рН до 8.0, използвайки TRIS буфер. След озвучаване за 5 минути пептидът се разтвори напълно.
Случай 2:Анализатор A (1-9)
Този пептид беше сравнително разтворим във вода, но клиентът искаше да увеличи разтворимостта за конкретен експеримент. Предложихме да добавим малко количество между 20 (0,1%) към разтвора. Това помогна да се предотврати агрегацията на пептидите и да се подобри разтворимостта.
Заключение
Оптимизирането на разтворимостта на каталожните пептиди е от решаващо значение за тяхната успешна употреба в различни приложения. Разбирайки факторите, които влияят на разтворимостта и използването на правилните стратегии, можете да гарантирате, че вашите пептиди се разтварят правилно и се представят както се очаква.
Ако все още имате проблеми с разтворимостта на пептиди или имате други въпроси относно нашите пептиди на каталога, не се колебайте да се свържете. Тук сме, за да ви помогнем да намерите най -добрите решения за вашите нужди от изследвания или разработки. Независимо дали сте изследовател в лаборатория или разработчик, работещ върху нов терапевтик, можем да ви предоставим висококачествени пептиди и експертни съвети. Така че, нека започнем разговор и да видим как можем да работим заедно, за да постигнем вашите цели.
ЛИТЕРАТУРА
- Goodman, M., et al. (2003). "Биосинтеза на пептиди и протеини." В цялостна химия на природни продукти, кн. 2, стр. 1-37.
- Wade, JD, & Tregear, GW (1993). "Пептиден синтез и дизайн." В методите в ензимологията, кн. 221, с. 1-61.
- Полета, GB, & Noble, RL (1990). "Синтез на пептид от твърда фаза, използващ 9-флуоренилметоксикарбонил аминокиселини." International Journal of Peptide and Protein Research, 35 (3), 161-214.