Биотин пептиди

Какво представляват биотинилираните пептиди?

Биотинилираните пептиди са пептиди, които са модифицирани, за да включват биотинова част. Тази модификация се възползва от взаимодействието с висок-афинитет между биотин и авидин или стрептавидин, което се използва широко в биологични и биохимични приложения. Молекулата на биотин е малка, стабилна и не променя значително структурата или функцията на пептида, като същевременно позволява високоефективно улавяне или откриване чрез системи, базирани на авидин-.

 

Химическа модификация
Биотинът обикновено се въвежда чрез NHS-биотин (N-хидроксисукцинимид биотин) реагент, който реагира с първичните аминогрупи, намиращи се в N-края на пептида или лизиновите остатъци, образувайки стабилна амидна връзка.

生物素（Биотин） 肽（Пептид）

COOH NH2

| |

+---EDC/NHS---→ 活化羧基（Активиране） → 缩合（Свързване）

↓ ↓

Биотин-CONH-пептид

 

Афинитетно взаимодействие
Биотинилираният пептид може да се свърже силно (Kd ~10⁻¹5 M) с авидин или стрептавидин, което го прави идеален за използване в анализи, които изискват прецизно откриване, улавяне или обездвижване.

Случаи на синтез на биотинилиран пептид

Пептидна последователност: биотин-Ahx-YXXXXXRXRRR-NH2

Дължина: 11A

Purity: >95%

M.W: 1898.32

Пептидна последователност: биотин-YXXXXXRXRRR--ERXXXDLXXXXPVXXXXPRR

Дължина: 31A

Purity: >95%

M.W: 4145.89

 

Приложения на биотинилирани пептиди

Биотинилираните пептиди са универсални инструменти в научните изследвания и индустрията, с широк спектър от приложения, включително:

Афинитетно пречистване

Използва се за пречистване на свързващи партньори като протеини, антитела или нуклеинови киселини чрез имобилизиране на биотинилирания пептид върху стрептавидинови перли.

ELISA и Western Blotting

Биотинилираните пептиди действат като проби за откриване на специфични взаимодействия, когато са свързани с авидин-HRP или авидин-флуоресцентни етикети.

Повърхностен плазмонен резонанс (SPR)

Използва се за имобилизиране на пептиди върху биосензорни чипове за изследвания на взаимодействията.

Откриване на наркотици

Скрининг на кандидати за лекарства чрез анализиране на тяхното свързване с биотинилирани пептидни цели.

Имунология

Биотинилираните пептиди се използват за картографиране на епитопи, изследване на взаимодействията на антиген-антитела и извършване на Т-клетъчни анализи.

Картографиране на епитоп за разработване на ваксина

Специализиран биотинилиран пептид беше използван за идентифициране на антигенни епитопи на вирусен протеин, помагайки за проектирането на кандидат за ваксина.

Протеин-Проучвания за взаимодействие на протеини

Биотинилираните пептиди, имобилизирани върху плаки, покрити със стрептавидин-, позволиха изследването на взаимодействията между рецептор-лиганди, разкривайки афинитетите на свързване, които са критични за разработването на лекарства.

Оптимизиране на имуноанализа

В диагностичен анализ биотинилираните пептиди са използвани като антигени за подобряване на чувствителността и специфичността на ELISA за откриване на биомаркери на заболяването.

 

Референции

1. Грийн, NM (1975).Авидин и стрептавидин.Biochemical Journal, 131 (3), 781-791.

2. Chaiet, L., & Wolf, FJ (1964).Свойствата на стрептавидин, биотин{0}}свързващ протеин, произведен от Streptomyces.Архив по биохимия и биофизика, 106 (1), 1-5.

3. Finn, FM, & Titus, G. (1994).Биотинилиране на протеини в изследванията и биотехнологиите.Anal Biochem, 218 (1), 1-7.